Оценка бактерицидной активности нейтрофилов по тесту восстановления нитросинего тетразолия/НСТ (НСТ-тест, способность к фагоцитозу и степень спонтанного кислородного метаболизма)
Оценка состояния иммунитета при инфекционных заболеваниях
НСТ-тест — метод, использующийся для оценки состояния клеток, обладающих фагоцитарной активностью.
Фагоцитарная активность лейкоцитов
Фагоцитоз — процесс, при котором клетки лейкоцитарного ряда (нейтрофилы и моноциты) захватывают и переваривают различные чужеродные частицы. При помощи фагоцитоза данные клетки осуществляют защиту организма от различных чужеродных агентов — бактерий, вирусов, патогенных грибов, простейших. Методы изучения активности фагоцитоза позволяют оценить возможности лейкоцитов в захвате и переваривании чужеродных веществ. Для визуализации процесса активизации фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов используется соединение — нитросиний тетразолий (НСТ), который поглощается клетками участвующих в фагоцитозе.
Биохимические механизмы активации клеток при фагоцитозе
При активации фагоцитирующих клеток крови после добавления к клеткам непатогенных штаммов некоторых бактерий в них происходит активация окислительных реакций и образование активных форм кислорода (супероксид анион-радикал — О-2 , перекись водорода — Н202, гидроксид радикал — ОН-) из молекулярного кислорода при участии фермента NADPH-оксидазы фагоцитов. Именно образовавшиеся активные формы кислорода и формируют биохимическую основу бактерицидного действия при фагоцитозе. Образовавшиеся активные формы кислорода активируют свободнорадикальные реакции, что приводит к разрушению мембран поглощенных чужеродных бактериальных клеток. Состояние, при котором увеличивается поглощение фагоцитирующими клетками кислорода в период активации и увеличение активных форм кислорода называется «респираторным взрывом».
HCT-тест (нитросиний тетразолий)
Добавленный нитросиний тетразолий после активации окислительных реакций интенсивнее превращается в активированных клетках в нерастворимое соединение темно-синего цвета формазан, который можно увидеть под микроскопом и оценить, таким образом, количество активированных нейтрофилов и моноцитов. Индуцированную активность рассчитывают как разницу между количеством нейтрофилов поглотивших НСТ и трансформировавших его в формазан до стимуляции (перед добавлением непатогенных бактерий) и количеством нейтрофилов после стимуляции фагоцитоза (после добавления). Повышение фагоцитарной активности происходит при инфицировании бактериями, аллергии, аутоиммунных заболеваниях. Снижение уровня активности обычно регистрируется при наличии хронических инфекций и врожденных нарушения системы фагоцитоза (мутация субъединиц NADPН-оксидазы и развитие хронической гранулематозной болезни).
Основные показания для назначения
Оценка иммунитета при инфекционных заболеваниях.
